پاورپوینت فرایند کلن کردن ژن - کلونینگ - سلول های تراریخت

فرایند کلن کردن ژن - کلونینگ - سلول های تراریخت

کلونینگ فرآیندی است که طی آن توالی مشخصی از ژنوم را جداسازی می کنند و با ادغام آن در یک DNA هدف، نسخه های یکسانی از ژنوم را در محیط طبیعی ( سلول یا بافت زنده ) تکثیر می نمایند. هدف از ژن کلونینگ فراهم کردن نسخه های متعدد از یک ژن منفرد است که در حوزه های مختلف تحقیقاتی مورد استفاده است.

1. استخراج ژن مورد نظر
2. انتقال ژن مورد نظر به ناقل مناسب
3. انتقال ناقل نوترکیب به درون سلول میزبان
4. گزینش سلول های تراریخت شده
5. تکثیر سلول های تراریخت شده

1. تولید انبوه یک پروتیین

مثال:انسولین انسانی هرمون رشد انسانی اینترفرون واکسن هپاتیت B اینترلوکین اریتروپوییتین

2. دستکاری مسیر های بیولوژیک جهت اصلاح محصولات گیاهی وحیوانی

مثال:تولید گوجه فرنگی که دیتر نرم ورسیده میشود

• ژن مورد نظر را وارد TeT R میکنیم سپس به درون باکتری انتقال میدهیم

3نوع سلول خواهیم داشت:

1. سلول هایی که پلاسمید وارد انها نشده
2. سلول هایی که حاوی پلاسمید غیر نوترکیب میباشند
3. سلول هایی که حاوی پلاسمید نوترکیب میباشند

• سلول های دسته اول به امپی سیلین حساس میباشند و دسته دوم وسوم مقاوم به امپی سیلین می باشند بنابر این با اضافه کردن امپی سیلین سلول های دسته اول را حذف میکنیم سپس 2 محیط کشت تهیه میکنیم که یکی محتوی امپی سیلین ودیگری محتوی تترا سایکلین

در محیط کشت امپی سیلین هر2 گروه سلول رشد میکنند و در محیط کشت تترا سایکلین سلول های حاوی پلاسمید غیر نوترکیب رشد میکند

بامقایسه باکتریها در این دو محیط کشت باکتری های تراریخت راشناسایی میکنیم

• ژن مورد نظر را وارد lacz میکنیم سپس وارد ECOLi میکنیم: 3 نوع سلول خواهیم داشت

1. سلول هایی که پلاسمید وارد انها نشده
2. سلول ها یی که حاوی پلاسمید غیر نوترکیب میباشد
3. سلول هایی که حاوی پلاسمید های نوترکیب میباشند